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ELISA实验中标曲怎么做?? ?
意大利贵宾会-贵宾会官方网站入口供稿:市场部意大利贵宾会-贵宾会官方网站入口宣布时间:2024-01-19意大利贵宾会-贵宾会官方网站入口浏览量:5600次
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曲线绘制的使用工具

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以下所述中使用的曲线绘制软件为Curve E xpert1.4, 列位先生们若有需要即可点击此链接下载自行下载使用 ;;

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标准曲线的绘制
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可以接纳种种绘图软件来绘制 ELISA 标准曲线 ,,下面以“Curve Expert1.4”软件为例 ,,绘制 ELISA 标准曲线的要领如下 ;;

1.启动“Curve Expert”

2.X 轴输入标准品的 OD 值(双抗夹心输入 OD-空缺值) ,,Y 轴输入所对应的浓度值 ,,如图:

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3.单击[运行]意大利贵宾会-贵宾会官方网站入口按钮 ,,泛起如下对话框

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4.单击[ok]按钮 ,,泛起如下两个对话框 ,,关闭下面一个对话框

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5. 在对话框的右上角泛起一些曲线的名称 ,,从“1”最先依次点击曲线名称 ,,在右下角会泛起响应拟合的曲线。。。。(一样平常选择第一个多项式拟合)

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6. 凭证拟合的曲线选取 ELISA 拟合度最佳的曲线双击 ,,泛起如下对话框:注重:选择系数(即“r”值)最好的曲线方程来举行运算。。。。

在下面的对话框 右上角有“r”值意大利贵宾会-贵宾会官方网站入口 ,,当“r”值越靠近 1 拟合度越好

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7.按[Ctrl]键+[L]键 ,,泛起如下对话框:

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8.输入标准的 OD 值 ,,单击[Calculate]按忸 ,,即可获得待测卵白的现实含量(标本稀释了 N 倍 ,,运算出的数值应在乘以 N)。。。。?

9. 如想获得 ELISA 拟合曲线的方程 ,,可在办法 6 的对话框空缺处右击 ,,选择”Information”

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10. 获得如下对话框:点击“Copy”

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在你需要的位置粘贴即可获得如下数据:

Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx^2)?

Coefficient Data:?

a = -21.531017?

b = 212.05019?

c = -0.24054479 d = 0.018060778?

11. 修改作图中 X,Y 坐标轴高度以及相关属性 选择办法 9 所示图中的第二排“Graph Properties” ,,修改好后点击 OK 生涯

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做标准曲线时有几个问题需要注重

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注重事项一

1、样品的浓度是凭证标准曲线盘算出来的 ,,以是要严酷凭听说明书指示举行操作 ,,标准曲线能直接反应操作是否准确。。。。

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注重事项二

2、样品浓度较高时 ,,应当稀释样本再举行检测 ,,样品OD值在标准曲线规模内才华获得更准确的盘算效果。。。。

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注重事项三

3、标准曲线的样品数一样平常为7个点(除去零孔/配景孔) ,,但至少要包管有5个点 ,,当标曲有个体孔读数值不正常时 ,,可以抠除。。。。

注重事项四

4、夹心法的标曲制作和样本浓度盘算时需要减掉0孔配景值 ,,竞争法不需要。。。。

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注重事项五

5、做出的标准曲线相关系数因实验要求差别而有所变换 ,,但一样平常来说 ,,相关系数R至少要大于0.99 ,,R值越靠近1 ,,说明标曲拟合越好。。。。

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