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Western Blot完全指南：手把手教你避开科研深坑！
供稿：市场部
宣布时间：2025-04-21
浏览量：1448次
【重磅干货】
Western Blot完全指南：手把手教你避开科研深坑！
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01.Western blot 的起源
1975年， ，，Edwin Southern发明了DNA杂交检测手艺， ，，命名为Southern blot。。。。
1977年， ，，James Alwine、David Kemp和George Stark发明了RNA杂交检测手艺， ，，命名为Northern blot。。。。
1979年， ，，位于美国斯坦福大学的George Stark发明了将卵白从电泳凝胶上转移到活化纤维素上的手艺， ，，随后Harry ToWestern blotin生长出更快速、简朴的“三明治”结构电转手艺。。。。
1981年Neal Burnette为了利便推广这一手艺正式将这一手艺命名为“Western blot”
02.Western blot 的用途
①确定目的卵白的表达情形
这是Western blot最通例的应用， ，，如检测患者的标本与正凡人的标本、实验条件处置惩罚后细胞与未处置惩罚的比照细胞之间目的卵白的表达转变情形， ，，通过灰度剖析可以确定目的卵白表达水平是升高照旧降低。。。。
②研究卵白间的相互作用
这是与免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation， ，，Co-IP）手艺相连系的一种检测卵白质之间相互作用的常用要领。。。。通过CO-IP手艺将相互作用的卵白质复合体疏散出来后举行凝胶电泳， ，，然后使用相互作用的卵白质的特异性抗体举行检测。。。。适用于对已知的卵白质的相互作用举行检测， ，，不适用于检测一个卵白质未知的相互作用卵白；；也可以用于卵白质-DNA、卵白质-RNA相互作用的后续剖析。。。。
③确定目的卵白的细胞定位
通太过别提取细胞差别部位的卵白质， ，，如膜卵白、胞浆卵白核卵白或线粒体卵白等， ，，将疏散出来的差别部位的卵白质举行Western blot检测可以划分检测目的卵白在差别部位的表达情形。。。。
03.Western blot 的原理
01.通过凝胶电泳凭证分子量巨细疏散卵白。。。。
02.将凝胶紧贴膜安排， ，，同时施加电流指导卵白从凝胶迁徙到膜上。。。。举行免疫染色时， ，，由于电泳凝胶倒运于抗体与其中的卵白连系， ，，以是需要举行卵白转膜。。。。
03.过靶向目的卵白的特异性抗体进一步孵育膜， ，，再通过二抗和检测试剂显示检测信号。。。。
04.Western blot 抗体选择
避坑指南：抗体选择的黄金规则
Western blot 的迅速度和特异性取决于抗体的质量和使用抗体的实验条件。。。。在使用含有血清和内源性免疫球卵白的组织裂解液或组织作育上清液时， ，，所选一抗的种属应有别于样本种属。。。。例如， ，，若是您研究的是小鼠卵白， ，，应选择在非小鼠的种属中作育的一抗（例如在兔中作育的一抗）。。。。这是为了阻止免疫球卵白二抗与样本中的内源性免疫球蛋鹤爆发交织反应。。。。使用不含内源性免疫球卵白的样本时， ，，一抗宿主种属的选择相对没那么严酷。。。。
为了使卵白显色， ，，需要选择一种可与一抗连系的（差别于一抗宿主种属的）二抗。。。。使用酶联二抗， ，，例如辣根过氧化物酶 (HRP) 偶联抗体或碱性磷酸酶 (AP) 偶联抗体， ，，或者经Western blot 优化的荧光偶联抗体， ，，可以提高迅速度。。。。记得确认偶联抗体的光发射波长是否与您的读数装置/扫描仪兼容。。。。
与单独的一抗相比， ，，偶联二抗的迅速度更高， ，，由于二抗可以在多个位点与一抗连系， ，，从而增强信号。。。。信号增强有利于检测重大卵白混淆物中的目的卵白， ，，以是二抗很是适适用于 Western blot。。。。
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